賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀詳細介紹

一、儀器概述

賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System）是一款應用廣泛的核酸定量分析平臺，基于熒光檢測技術(shù)對PCR擴增過(guò)程中的目標核酸進(jìn)行實(shí)時(shí)監控與分析。該系統整合了精準的溫控模塊、靈敏的光學(xué)檢測系統以及成熟的數據分析軟件，適用于科研、臨床、食品安全、環(huán)境監測等多個(gè)領(lǐng)域。

該儀器采用5通道光學(xué)系統設計，支持多重PCR反應，可以同時(shí)檢測多種靶標，提高了實(shí)驗效率。在操作流程方面，設備配合用戶(hù)友好的軟件平臺，使整個(gè)實(shí)驗從設計、運行到數據分析更加系統化和直觀(guān)。

二、技術(shù)參數

1. 光學(xué)系統

• 5個(gè)獨立熒光通道，支持FAM、VIC、SYBR Green、ROX、TAMRA等多種常用熒光染料

• 高性能CCD檢測器，具備高靈敏度和信號線(xiàn)性響應

• 高效濾光片切換機制，確保信號采集的準確性與重復性

2. 溫控系統

• 基于Peltier元件的溫控模塊

• 升降溫速率約為1.6℃/秒

• 控溫精度為±0.25℃，保證擴增過(guò)程的穩定性

3. 樣本通量

• 標準96孔板格式，支持多種通用PCR耗材

• 單次運行可同時(shí)處理96個(gè)反應體系，適合中等通量的實(shí)驗需求

4. 反應體積

• 推薦反應體積：10–30 μL

• 支持多種體積設定，滿(mǎn)足不同試劑體系要求

5. 軟件功能

• Applied Biosystems SDS軟件支持定量分析、相對定量、基因表達分析、熔解曲線(xiàn)分析等

• 數據輸出格式多樣，便于與其他數據平臺對接

• 實(shí)驗過(guò)程實(shí)時(shí)監控，提供擴增曲線(xiàn)、標準曲線(xiàn)和Ct值信息

三、主要功能和應用場(chǎng)景

1. 絕對定量與相對定量分析

• 通過(guò)標準曲線(xiàn)建立靶基因的濃度與Ct值之間的關(guān)系，實(shí)現準確定量

• 在無(wú)標準品情況下，通過(guò)內參基因對比實(shí)現相對定量

2. 基因表達分析

• 應用于轉錄水平研究，可對不同條件下的基因表達水平變化進(jìn)行監測

• 配合高質(zhì)量引物設計和反轉錄體系，提高表達分析準確度

3. SNP分析和基因分型

• 利用TaqMan探針技術(shù)進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測

• 可進(jìn)行等位基因識別和樣本分型，適合遺傳研究和個(gè)體化醫學(xué)

4. 病原體檢測與載量分析

• 適用于臨床診斷實(shí)驗室中對病毒、細菌等病原體的快速檢測

• 能在早期感染階段提供檢測依據，有助于疾病預警與防控

5. 食品與環(huán)境檢測

• 檢測轉基因成分、致病菌殘留、過(guò)敏源等

• 在水質(zhì)檢測、土壤微生物分析等環(huán)保項目中也有良好適應性

四、操作流程簡(jiǎn)介

1. 樣品準備

• 提取DNA或RNA樣品并進(jìn)行質(zhì)量評估

• 進(jìn)行反轉錄反應（如有需要），合成cDNA

2. 反應體系配制

• 配制PCR反應液，包括引物、探針、酶、緩沖液和模板

• 分裝入96孔板，封板后離心去除氣泡

3. 儀器設置與運行

• 打開(kāi)SDS軟件，設定擴增程序和檢測通道

• 加載樣本并啟動(dòng)反應程序

4. 數據分析

• 采集并分析擴增曲線(xiàn)，獲取Ct值和標準曲線(xiàn)

• 導出分析報告，進(jìn)一步做統計或圖表處理

五、優(yōu)勢特點(diǎn)

1. 操作界面直觀(guān)
   軟件操作簡(jiǎn)潔，實(shí)驗流程明晰，有助于新手快速掌握使用技巧。

2. 結果可靠性高
   儀器具備良好的穩定性和重復性，適用于長(cháng)期批量實(shí)驗。

3. 多通道檢測
   一次運行可完成多重靶標檢測，節約時(shí)間和樣本資源。

4. 維護便捷
   設備結構設計合理，日常維護工作量小，延長(cháng)使用壽命。

六、維護與注意事項

1. 日常維護

• 定期擦拭光學(xué)部件，防止塵埃影響信號檢測

• 避免強光直射儀器，保持室內恒溫環(huán)境

• 檢查Peltier元件工作狀態(tài)，避免過(guò)載運行

2. 使用注意事項

• 正確選擇熒光染料和通道，避免信號交叉干擾

• 使用專(zhuān)用PCR耗材，確保熱傳導與熒光透明度

• 實(shí)驗前做好模板與反應體系的充分混勻，減少誤差

七、適用領(lǐng)域舉例

• 醫學(xué)研究：腫瘤標志物、病毒檢測、突變篩查

• 分子生物學(xué)：基因表達調控、功能基因篩選

• 農業(yè)科學(xué)：轉基因檢測、病害早期監控

• 法醫學(xué)：DNA指紋、樣本溯源分析

八、結語(yǔ)

賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在多個(gè)科研和應用領(lǐng)域中展現出良好的性能表現，其穩定的檢測平臺和完善的數據處理功能為用戶(hù)提供了可靠的核酸檢測方案。盡管隨著(zhù)技術(shù)的發(fā)展，更新型號不斷推出，但7500系統依然憑借其成熟的設計和廣泛的用戶(hù)基礎，在眾多實(shí)驗室中發(fā)揮著(zhù)重要作用。