細胞轉染是指將外源性核酸（如DNA、RNA）引入活細胞的一種實(shí)驗技術(shù)。通過(guò)轉染，研究人員可以將特定的基因、siRNA、shRNA或其他核酸分子導入細胞，以研究這些分子在細胞內的功能、表達及其對細胞行為的影響。

1. 什么是細胞轉染：細胞轉染的類(lèi)型

細胞轉染主要分為兩種類(lèi)型：

1.1 瞬時(shí)轉染（Transient Transfection）

瞬時(shí)轉染是指外源核酸在細胞內短時(shí)間表達的過(guò)程。由于外源DNA/RNA不會(huì )整合到宿主基因組中，所以在轉染后的幾天內，基因表達會(huì )逐漸降低并最終消失。瞬時(shí)轉染常用于快速評估基因功能、蛋白質(zhì)表達水平或RNA干擾實(shí)驗。

1.2 穩定轉染（Stable Transfection）

穩定轉染則是指外源核酸整合到宿主細胞基因組中，從而實(shí)現長(cháng)期的基因表達。在穩定轉染的過(guò)程中，轉染后的細胞在選擇性培養條件下會(huì )經(jīng)過(guò)多代細胞分裂，最終形成穩定表達外源基因的細胞系。穩定轉染適用于長(cháng)期研究基因功能、藥物篩選以及構建轉基因細胞系。

2. 什么是細胞轉染：細胞轉染的方法

細胞轉染有多種方法，每種方法都有其優(yōu)勢和適用范圍。以下是幾種常見(jiàn)的轉染方法：

2.1 化學(xué)轉染

化學(xué)轉染是常用的轉染方法之一，包括脂質(zhì)體介導轉染和磷酸鈣共沉淀轉染。

• 脂質(zhì)體轉染：脂質(zhì)體是一種模擬細胞膜的人工脂質(zhì)雙層囊泡，能夠包裹DNA或RNA并與細胞膜融合，將核酸遞送到細胞內。脂質(zhì)體轉染方法廣泛應用于各種細胞類(lèi)型，具有操作簡(jiǎn)便和轉染效率高的特點(diǎn)。

• 磷酸鈣共沉淀：在這種方法中，外源DNA與鈣離子結合形成沉淀物，然后與細胞表面接觸，通過(guò)內吞作用進(jìn)入細胞。磷酸鈣轉染技術(shù)歷史悠久，但與其他方法相比，其轉染效率和操作穩定性較低。

2.2 電轉染（Electroporation）

電轉染是利用高強度的電場(chǎng)在細胞膜上形成臨時(shí)的小孔，使外源核酸分子進(jìn)入細胞。電轉染適用于多種細胞類(lèi)型，包括一些難轉染的細胞，但需要精確控制電場(chǎng)強度以避免細胞損傷。

2.3 病毒載體轉染

病毒載體轉染利用病毒的天然感染機制將外源基因導入宿主細胞。常用的病毒載體包括腺病毒、慢病毒和逆轉錄病毒。病毒載體轉染的優(yōu)點(diǎn)是具有轉染效率，尤其適用于難以轉染的細胞類(lèi)型，以及體內基因治療研究。

2.4 物理轉染

物理轉染方法包括基因槍?zhuān)≒article Bombardment）和微針注射（Microinjection）。這些方法利用物理手段直接將核酸引入細胞。

• 基因槍：通過(guò)將核酸附著(zhù)在金屬微粒上，以高速度轟擊細胞，從而將核酸直接引入細胞中?；驑尦Ｓ糜谥参锛毎D染。

• 微針注射：利用顯微注射技術(shù)，將外源核酸直接注射到細胞核內。這種方法適用于單細胞實(shí)驗，但操作復雜且費時(shí)。

3. 細胞轉染的應用

細胞轉染技術(shù)在分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究中有著(zhù)廣泛的應用，包括但不限于：

• 基因功能研究：通過(guò)過(guò)表達或沉默特定基因，研究其在細胞中的功能及其調控機制。

• 蛋白質(zhì)表達：通過(guò)瞬時(shí)或穩定轉染外源基因，生產(chǎn)目標蛋白質(zhì)，用于結構功能分析或藥物開(kāi)發(fā)。

• RNA干擾實(shí)驗：利用siRNA或shRNA轉染細胞，沉默特定基因，研究基因的功能或篩選潛在的治療靶點(diǎn)。

• 基因編輯：將CRISPR/Cas9系統轉染至細胞中，進(jìn)行基因組編輯，如基因敲除或基因修復。

• 藥物篩選：通過(guò)轉染藥物靶基因，評估藥物對基因表達或蛋白質(zhì)活性的影響，為藥物開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗依據。

4. 影響轉染效率的因素

轉染效率受到多種因素的影響，包括：

• 細胞類(lèi)型：不同細胞對轉染方法的敏感性不同，某些細胞類(lèi)型如干細胞或初級細胞通常較難轉染。

• 核酸純度：高純度的DNA或RNA樣品通常能夠提高轉染效率，減少非特異性反應。

• 轉染試劑：選擇合適的轉染試劑或方法對于提高轉染效率至關(guān)重要。

• 細胞狀態(tài)：健康的、處于對數生長(cháng)期的細胞通常具有較高的轉染效率。

• 實(shí)驗條件：如轉染試劑的用量、孵育時(shí)間和溫度等，均會(huì )影響轉染效果。

5. 結論

細胞轉染是現代生物學(xué)研究中的核心技術(shù)之一，廣泛應用于基因功能研究、藥物篩選、基因治療等領(lǐng)域。選擇合適的轉染方法和條件，能夠有效提高轉染效率，確保實(shí)驗結果的可靠性和可重復性。隨著(zhù)技術(shù)的不斷進(jìn)步，細胞轉染方法將繼續發(fā)展，為科學(xué)研究提供更強大的工具和方法。